COMPARISON OF MODIFICATIONS OF THE METHOD FOR DETECTION OF PLUM POX VIRUS DAS-ELISA
Martina Rejlová, Lucie Valentová, Radek Čmejla
VÝZKUMNÝ A ŠLECHTITELSKÝ ÚSTAV OVOCNÁŘSKÝ HOLOVOUSY s.r.o.,
Holovousy 129, 508 01
email: martina.rejlova@vsuo.cz, ORCID: 0000-0002-6687-8508
VPO 30(2): 75–86, 2024
Accepted: 15. 9. 2024
Published: 11. 11. 2024
ABSTRAKT
V souvislosti s detekcí patogenů ovocných plodin v období sezónních kontrol často řeší diagnostické laboratoře situace, kdy je nutné v krátkém čase analyzovat velký počet vzorků. Pozornost jsme proto zaměřili na vývoj rychlejšího a efektivnějšího diagnostického postupu k detekci viru neštovic peckovin (PPV, Plum pox virus). Standardně se k detekci PPV v rostlinném materiálu používá relativně levná a jednoduchá sérologická metoda, tzv. sendvičová ELISA (double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay, DAS-ELISA). Standardní doba detekce metodou DAS-ELISA od firmy Bioreba AG trvá 32 hodin. Optimalizace metody spočívala ve zkrácení inkubačních časů a navýšení inkubační teploty. Současně bylo nutné přistoupit k navýšení koncentrace protilátek, aby byla zachována citlivost metody. Detekce patogenu pomocí upravené metody DAS-ELISA od firmy Bioreba AG může poskytnout výsledky za jeden pracovní den (8,5 hod).
Klíčová slova: DAS-ELISA, diagnostika, Plum pox virus, optimalizace metody
ABSTRACT
During seasonal inspections and a need for detection of fruit tree pathogens, diagnostic laboratories often have to deal with situations where a large number of samples have to be analyzed in a short time. We therefore focused on the development of a faster and more efficient diagnostic procedure for the detection of Plum pox virus (PPV). A relatively cheap and simple serological method, the double antibody sandwich enzyme linked immunosorbent assay (DAS-ELISA), is usually used to detect PPV in plant material. The standard detection time for the DAS-ELISA kit sold by Bioreba AG is 32 hours. The optimization of the method involved reducing the incubation times and increasing the incubation temperature. At the same time, it was necessary to increase the antibody concentration to maintain the sensitivity of the method. Pathogen detection using a modified DAS-ELISA method from Bioreba AG can provide in one working day (8.5 h).
Keywords: DAS-ELISA, diagnostics, Plum pox virus, method optimization
